bet28365体育 您现在的位置:主页 > bet28365体育 >
嗜水气单胞菌CphA酶与碳青霉烯类抗生素的分子识别和相互作用
2019-08-05 10:03
嗜水气单胞菌CphA酶与碳青霉烯类抗生素的分子识别和相互作用
Chang Jari
[摘要]金属β-内酰胺酶(MβL)通过水解β-内酰胺抗生素的β-内酰胺环来防止抗生素对抗细菌感染。
嗜水气单胞菌CphA酶是MβLs亚群的成员,在活性位点仅具有一个Zn2 +并且仅特异性水解碳青霉烯抗生素。
然而,关于CphA酶和碳青霉烯抗生素之间的分子识别和相互作用知之甚少。
本研究基于重组CphA酶在结合亚胺培南(IMP)和比阿培南(BIA)的重组细菌中的表达和纯化,荧光光谱和分子结合模拟。结合,抗生素分子的空间分布方向,复合物形成的性质,它们之间的相互作用类型和作用位点的数量。
(1)通过阳离子交换层析表达,分离和纯化含有pET28b-CphA的大肠杆菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE和Bradford蛋白质含量鉴定,最后通过荧光诱导表征我做到了。
结果表明,具有最高活性和纯度的样品在纯化后具有约28KDa的分子量和约0的产率。
18?0。
发现336为21mg / ml,激发波长为278nm。
荧光在2nm处明显。
(2)277K,pH 7。
4在PBS中,IMP和BIA中CphA酶的Kph分别为356μM和286μM。通过荧光发射光谱法,CphA酶与IMP和BIA的分子饱和度之比为零。
95和0。
98;同步荧光光谱结果表明它们相互作用,Tyr残基附近的微环境略有变化。IMP和BIA结合过程中CphA酶的冷却光谱在三个温度下测定:277K,281K和285K。它们之间的冷却是静态冷却。它们由单个结合位点连接,并且是自发发热过程。
(3)分子偶联结果表明CphA酶在结合过程中与IMP和BIA有一些相似之处:两个β-内酰胺抗生素环的C3羧酸盐氧你是否直接与Zn2形成金属配位键??+促进相互作用并引起CphA酶环的局部构象变化。
不同之处在于IMP侧链具有较小的空间位阻,因此一切都进入袋中。在相互作用过程中有3组静电力和5组氢键。侧链双环三唑对BIA的空间位阻。侧链的大部分都在口袋外面。在相互作用过程中有4组静电力和2组氢键。CphA酶对BIA的亲和力大于IMP的亲和力,并且CphA?BIA复合物的形成稳定性也大于CphA?IMP复合物的形成稳定性。
荧光光谱中CphA-BIA复合体系的Ksv和Ka高于CphA-IMP复合体系的Ksv和Ka这一事实也证实了这一推论。
此外,耦合结果表明△G复合体系是负的。这表明两种配合物的形成是与先前热力学结果一致的自发放热过程。
[学位学分]:西北大学[学年]:硕士[毕业年份]:2017年[分类号]:R96
下载全文
更多类似的文件


bet787网址